下面介紹的內(nèi)容主要就是在測量菌液電導(dǎo)率的實驗中,介紹需要用的儀器設(shè)備以及測定方法,電導(dǎo)率的測定少不了的儀器就是上海雷磁儀器廠生產(chǎn)的電導(dǎo)率儀DDS-307A,下面從實驗室儀器需要以及實驗方法進行簡單介紹。
1、儀器與設(shè)備
上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)的高速冷凍離心機;FluoroMax-4熒光光譜儀法國;JSM-6360LV掃描電子顯微鏡日本電子株式會社;LGJ-12冷凍干燥機北京松源華興科技發(fā)展有限公司;S-3000N型掃描電子顯微鏡、H-7650型透射電子顯微鏡日本日立公司;EM UC6超薄切片機 德國Leica公司;上海雷磁儀器廠生產(chǎn)的DDS-307A型電導(dǎo)率儀上海智光儀器儀表有限公司;UV-2450紫外-可見分光光度計日本島津公司;HP6890氣相色譜儀(配5973質(zhì)譜檢測器) 美國安捷倫科技有限公司。
2、方法
單離香料氣相熏蒸大腸桿菌及最低抑菌濃度和最低殺菌濃度的測定:大腸桿菌超顯微結(jié)構(gòu)觀察取正常培養(yǎng)和經(jīng)200μL/L芳樟醇處理24h的大腸桿菌含菌平板,固定樣品,通過掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡來觀察大腸桿菌超顯微結(jié)構(gòu)。
上海雷磁DDS-307A電導(dǎo)率分析:取正常培養(yǎng)和經(jīng)芳樟醇處理的大腸桿菌含菌平板,用無菌水收集菌體,用分光光度計將各菌懸液調(diào)OD600nm至1.000±0.005,用上海雷磁DDS-307A電導(dǎo)率儀測各菌懸液電導(dǎo)率。
紫外吸收的測定:參考方法,取菌懸液在11000 r/min條件下離心10min,取3mL上清液,用紫外分光光度計在260nm波長處測定OD值。
大腸桿菌DNA電泳分析:取1.5 mLOD600nm為0.5的菌懸液,按DNA提取試劑盒操作在8000r/min條件下離心2min,棄上清液,提取菌體內(nèi)的DNA,以Tris-硼酸緩沖液配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.8%凝膠(加入0.06%的GoldView染料),潛水點樣,100V穩(wěn)壓電泳30min,于紫外凝膠圖像分析儀下觀察DNA條帶亮度的變化,拍照并分析結(jié)果。
可溶性蛋白質(zhì)量濃度的分析:以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取菌液于7000r/min離心10min。參照方法,取0.3mL上清液并將其稀釋至1 mL,加入5mL考馬斯亮藍G-250顯色液(含體積分?jǐn)?shù)0.01%考馬斯亮藍G-250、4.7%乙醇、8.5%磷酸),振蕩混勻,5 min后測其在595 nm波長處的吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出相應(yīng)樣品的蛋白質(zhì)量濃度。
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